吸光度分析和熒光分析是兩種不同但互補(bǔ)的技術(shù)，用于檢測(cè)和定量樣品中的目標(biāo)分析物。測(cè)量特定波長(zhǎng)的紫外光和可見(jiàn)光 （UV-Vis） 的吸光度是定量生物分子的成熟方法之一。同時(shí)，熒光分析長(zhǎng)期以來(lái)一直用于測(cè)量熒光團(tuán)與波長(zhǎng)激發(fā)的樣品結(jié)合的發(fā)射光譜，以進(jìn)行高度特異性的分子定量。

1. 靈敏度

吸光度和熒光分析在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中通常用于測(cè)量小體積樣品。微量分光光度計(jì)能夠檢測(cè) 1 μL 樣品中低至 0.75 ng/μl 的雙鏈 DNA。使用 DeNovix 高靈敏度檢測(cè)試劑盒進(jìn)行熒光分析可產(chǎn)生皮克 （pg） 級(jí)靈敏度，可實(shí)現(xiàn)低至 0.005 ng/μl 的檢測(cè)。

2. 動(dòng)態(tài)范圍的差異

測(cè)量的動(dòng)態(tài)范圍也是比較方法的一個(gè)考慮因素。就測(cè)量范圍的寬度而言，吸光度優(yōu)于熒光分析。以 dsDNA 為例，熒光定量試劑盒廣泛的檢測(cè)范圍可達(dá) 4000 ng/μl，而微量分光光度計(jì)中的上限目前為 37500 ng/μl。

3. 檢測(cè)要求

吸光度分光光度計(jì)直接測(cè)量樣品吸收的特定波長(zhǎng)的量，無(wú)需稀釋或分析制備。相比之下，熒光分析需要將目標(biāo)樣品與檢測(cè)試劑盒中的熒光試劑結(jié)合。還必須將樣品與已知濃度的類似樣品進(jìn)行比較。因此，在進(jìn)行熒光定量分析時(shí)，有必要準(zhǔn)備和測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4. 污染檢測(cè)

雖然熒光的特異性有利于評(píng)估目標(biāo)分析物的濃度，但所得數(shù)據(jù)無(wú)法深入了解樣品中的任何污染。相比之下，可以通過(guò)在一系列波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行吸光度光譜測(cè)量來(lái)推斷出許多不同的污染物。評(píng)估 260/280 nm 和 260/230 nm 等比率可提供有價(jià)值的信息，并且可以作為樣品質(zhì)量控制制度的一部分實(shí)施。

使用 DeNovix 進(jìn)行吸光度和熒光分析

DeNovix 認(rèn)識(shí)到將吸光度和熒光分析結(jié)合到一個(gè)綜合設(shè)備中的好處，使科學(xué)家能夠利用每種方法的優(yōu)勢(shì)。我們的 DS-11 系列將市場(chǎng)上靈敏的超微量紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)與集成熒光計(jì)相結(jié)合。這提供了寬動(dòng)態(tài)范圍和更高的靈敏度，以及特異性分析物定量和污染物檢測(cè)。