丙酮酸(PA)含量測試盒

丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。 

測定原理：

丙酮酸與2,4-二硝*苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝*苯腙，在堿性溶液中呈顯色。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體2.5mL×1瓶， 4℃保存； 

試劑二：液體12.5mL×1瓶， 4℃保存。

丙酮酸提?。?/p>

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），靜置30min， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，25℃離心10min，取上清待測。

3、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL樣本和25μL試劑一，混勻，靜置2min，加入125μL試劑二，混勻，于520nm波長處測定管吸光值A(chǔ)。

丙酮酸含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675； x為丙酮酸含量（µg/mL），y為吸光值。

2、按照血清（漿）體積計算

丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白濃度計算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計算

丙酮酸含量（µg/g鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

丙酮酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.075mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0233x + 0.0675； x為丙酮酸含量（µg/mL），y為吸光值。

2、按照血清（漿）體積計算

丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷（V3×V1÷V2）=429.2×(A-0.0675)

3、按照蛋白濃度計算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V1×Cpr)=42.92×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照樣品質(zhì)量計算

丙酮酸含量（µg/g鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(W ×V1÷V2）=42.92×(A-0.0675) ÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

丙酮酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷（500×V1÷V2）=0.086×(A-0.0675)

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.075mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。

注意：*低檢測限為1μg/mL或1μg/g鮮重或10ng/mg prot

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

丙酮酸(PA)含量測試盒