乳酸含量（LA）測試盒

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質，在530nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制 

提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體2mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入0.6mL蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加6mL蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。

標準品：液體1mL×1支，4℃保存。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有4個棕色空瓶）

樣本處理

1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。              

測定操作

注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設一個樣品對照管

計算公式

1. 按照蛋白含量計算

LA含量（μmol/mg prot）= △A樣÷△A標×C標÷ Cpr

                      = 2×△A樣÷△A標÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

LA含量（μmol/g 鮮重）= △A樣÷△A標×C標÷ W

                      = 2×△A樣÷△A標÷ W

3. 按照細胞數(shù)量計算

LA含量（μmol/104 cell）= △A樣÷△A標×C標÷ 細胞數(shù)量

                      = 2×△A樣÷△A標÷ 細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

LA含量（μmol/mL）= △A樣÷△A標×C標

                   = 2×△A樣÷△A標

C標：標準品濃度，2mmol/L；W：樣本質量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL

注意事項

若吸光值超過2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

*低檢出限為1.8μmol/L。

上海牧榮生物科技有限公司

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